Investigarea subfracțiunilor lipoproteice la pacienții cu tulburări ale metabolismului lipidic

DISERTATURA UNIVERSITARĂ DE DOCTORAT (dr.) Investigația subfracțiunilor de lipoproteine în bolile asociate cu tulburările metabolismului lipidic Hajnalka Lőrincz Supervizor: Dr. Ildikó Seres UNIVERSITATEA DEBRECENĂ ȘCOALA DOCTORALĂ DE ȘTIINȚE ALE SĂNĂTĂȚII 2015 Debrecen

Cuprins Abrevieri. 4 1. Introducere. 6 2. Revizuirea literaturii. 8 2.1. Lipoproteine. 8 2.1.1. Structura generală a lipoproteinelor plasmatice. 8 2.1.2. Metabolizarea lipoproteinelor. 9 2.2. Eterogenitatea lipoproteinelor LDL și HDL. 13 2.2.1. Structura lipoproteinelor cu densitate redusă (LDL), funcția și metodele utilizate pentru separarea subfracțiunilor LDL. 14 2.2.2. Structura și funcția lipoproteinelor de înaltă densitate (HDL) și metodele utilizate pentru separarea subfracțiunilor HDL. 17 2.3. Tulburări lipidice. 21 2.3.1. Adipokine și obezitate. 23 2.3.2. Chemerin. 24 2.3.3. Anomalii lipidice în obezitate. 27 2.3.4. Sindromul Smith-Lemli-Opitz. 28 3. Obiective. 31 4. Pacienți și metode. 32 4.1. Selecția pacienților obezi. 32 4.2. Selecția pacienților cu sindrom Smith-Lemli-Opitz. 32 4.3. Prelevarea de probe de sânge și măsurarea parametrilor de laborator. 33 4.4. Separarea subfracțiunilor LDL și HDL. 34 4.5. Determinarea nivelului de chemerină serică. 39 4.6. Determinarea nivelului de 7-dehidrocolesterol și a activității paraoxonazei-1. 39 2

4.7. Analize statistice. 40 5. Rezultate. 41 5.1. Relația dintre concentrația serică de chemerină și subfracțiile de lipoproteine la persoanele obeze, nediabetice și cu greutate normală. 41 5.2. Distribuția subfracțiunilor de lipoproteine în SLOS și copiii de control. 49 5.3. Relațiile dintre activitatea PON1 paraoxonază și arilesterază serică și activitatea PON1 arilesterază și parametrii lipoproteinelor la SLOS și copiii de control. 54 6. Discuție. 56 7. Rezumat. 63 8. Rezumat. 65 9. Referințe. 66 10. Lucrări pe care se bazează disertația. 77 Anexa 11. 79 3

Abrevieri 7DHC ABCAI ABCGI apo BMI CETP CMKLR1 ELISA 7-dehidrocolesterol ATP binding cassette protein AI ATP binding casette protein GI apolipoprotein index corporal de masă colesterol ester transfer protein to chemokin like receptor1 Hbcc h hAcA HSPG IDL IL-6 IKKß JNK LDL MCP 1 evaluarea modelului de homeostazie a lipoproteinelor de înaltă densitate rezistență la insulină cromatografie lichidă la presiune înaltă proteină reactivă C heparan sulfat proteoglican densitate intermediară nuclepa nucleoproteină interlineală 6 -b kinază inhibitor c-jun kinază N-terminală lipoproteină cu densitate scăzută lipoproteine monocite proteine chemoattractante-1 4

MTP NF-κB RMN OGTT PON1 proteină de transfer trigliceridă microzomală factor nuclear kappa-b test de rezonanță magnetică nucleară toleranță orală la glucoză umană paraoxonază-1 proteină de legare a retinolului RBP4 4 SLOS SR-BI TNFα VLDL Sindrom Smith-Lemli-Opitz factor scavenger tumora tumorală lipoproteine cu densitate mică 5

Tabelul 1: Clasificarea lipoproteinelor după densitate (pe baza lui Jonas, 2002) Kilomicron VLDL IDL LDL HDL Densitate (g/ml) de 1000 de ori) și în mai multe cazuri pot fi detectate niveluri de colesterol total extrem de scăzute (Tint și colab., 1995a) . acetil coa (C 2) + acetoacetil coa (C 4) 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA mevalonat lanosterol zimosterol colest-8 (9) -en-3ß-ol cholesta-7,24-dien-3ß-ol latosterol 7- dehidrodesodosterol 7-dehidrocolesterol SLOS 7DHCR 7DHCR SLOS desmosterol colesterol Figura 3: Defect în calea biosintezei colesterolului în sindromul Smith-Lemli-Opitz (SLOS) cauzat de funcția enzimei 7-dehidrocolesterol reductază (parțială sau 7DHCR). 29

(b) (a) (c) Figura 4: (a) Model schematic al benzilor de subfracție LDL după electroforeză: prima bandă este VLDL, sub care se află 3 benzi de bandă mediană care conțin resturi IDL și VLDL, iar apoi subfracțiile mari LDL (LDL) -1, -2), urmează mici subfracțiuni LDL dense (LDL-3, -4, -5, -6, -7) și banda HDL. Panoul (b) prezintă o imagine densitometrică a unei persoane sănătoase cu subfracțiuni LDL predominant mari (dimensiunea medie a LDL 27,18 nm; marcată în galben), în timp ce panoul (c) prezintă o imagine densitometrică anormală reprezentativă a unui pacient care prezintă subfracția LDL cu densitate mică ( dimensiunea medie a LDL 26,40 nm (marcată cu roșu). 36

(b) (a) (c) Figura 5: (a) Model schematic al benzilor de subfracțiune HDL după electroforeză: fracția superioară, cu mișcare lentă, este banda VLDL + LDL, care este HDL major (HDL-1, -2, -3), urmată de subfracții HDL medii (HDL-4, -5, -6, -7) și mici HDL (HDL-8, -9, -10). Cea mai rapidă fracție în mișcare este albumina. Panoul (b) prezintă o imagine densitometrică a unei persoane sănătoase, în timp ce panoul (c) prezintă o imagine densitometrică reprezentativă a unui pacient. 38